ПРОТЕИНОГЕННЫЕ АМИНОКИСЛОТЫ В КОМБИКОРМАХ

МВИ М-04-38-2004

ВВЕДЕНИЕ

Настоящая методика предназначена для определения в комбикормах и в исходном сырье для их производства всех 20-ти протеиногенных аминокислот: аргинина, лизина, тирозина, фенилаланина, гистидина, лейцина и изолейцина (суммарно), метионина, валина, пролина, треонина, серина, аланина, глицина, цистина, триптофана, аспарагиновой и глутаминовой кислот.

Так как в процессе разложения проб аспарагин и глутамин количественно гидролизуются до аспарагиновой и глутаминовой кислот соответственно, то данные по содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот представляют собой суммарное содержание этих кислот и соответствующих амидов.

МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ

Определение аминокислот в пробах проводят после предварительного щелочного (триптофан) или кислотного гидролиза (все остальные определяемые компоненты). Свободные аминокислоты в гидролизатах переводят в фенилтиокарбамильные производные (ФТК-производные) при помощи фенилизотиоцианата и разделяют их ионные формы в кварцевом капилляре под действием электрического поля. Регистрацию ФТК-производных производят при длине волны 254 нм в соответствующем буферном растворе.

ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ

Диапазоны измеряемых содержаний аминокислот приведены в таблице.

Аминокислота (символ)

Массовая доля в пробе, %*

Аминокислота (символ)

Массовая доля в пробе, %*

Аланин (Ala)

0,25-5,0

Метионин (Met)

0,25-5,0

Аргинин (Arg)

0,5-5,0

Пролин (Pro)

0,25-10,0

Аспарагиновая кислота+аспарагин (Asp+Asn)

0,5-10,0

Серин (Ser)

0,25-5,0

Валин (Val)

0,5-5,0

Тирозин (Tyr)

0,25-5,0

Гистидин (His)

0,5-5,0

Треонин (Thr)

0,5-5,0

Глицин (Gly)

0,25-10,0

Триптофан (Trp)

0,1-2,0

Глутаминовая кислота+глутамин (Glu+Gln)

0,5-10,0

Фенилаланин (Phe)

0,25-5,0

Лейцин+изолейцин (Leu+Ile)

0,25-10,0

Цистин (Cys-Cys)

0,1-2,0

Лизин (Lys)

0,25-10,0

 

 

* В расчете на навеску 100 мг

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАКТИВЫ ДЛЯ АНАЛИЗА

При выполнении измерений применяются следующие оборудование и реактивы:

  • Система КЭ КАПЕЛЬ®-103РТ/104Т/104М/105/105М, имеющая специальную кассету для анализа аминокислот
  • Вода дистиллированная
  • Натрия гидроксид, х.ч.
  • Натрия тетраборат 10-водный, х.ч.
  • Натрия карбонат 10-водный, х.ч.
  • Натрия дигридрофосфат 12-водный, х.ч.
  • Бария гидроксид 8-водный, х.ч.
  • Натрия гидрофосфат (моно- или дигидрат), х.ч.
  • Серная кислота, х.ч.
  • Соляная кислота, х.ч.
  • Муравьиная кислота, х.ч.
  • Пероксид водорода, 30%, х.ч.
  • Спирт этиловый ректификованный
  • Спирт изопропиловый, х.ч.
  • Набор L-аминокислот
  • Фенилизотиоцианат, имп.
  • β-циклодекстрин (β-ЦД), имп.
  • Метиловый красный, индикатор, ч.

Сбор, обработку и вывод данных осуществляют с помощью персонального компьютера с операционной системой Windows 98/ME/NT/2000/XP, на котором установлена программа сбора и обработки хроматографических данных «Мультихром для Windows».
Для модификаций КАПЕЛЬ-105М/104М управление прибором, сбор и обработка результатов осуществляется с помощью программного обеспечения «Эльфоран».

ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ

Методика предусматривает проведение анализа из трех навесок пробы. Ход анализа навесок различается процедурой пробоподготовки, условиями электрофоретического определения и перечнем определяемых аминокислот.

1. Для определения аминокислот:
аргинин, лизин, тирозин, фенилаланин, гистидин, сумма лейцина и изолейцина, метионин, валин, пролин, треонин, серин, аланин и глицин проводят кислотный гидролиз навесок комбикормов под действием соляной кислоты по ГОСТ 13496.21-87.

2. При определении аспарагиновой, глутаминовой кислот и цистина (в форме цистеиновой кислоты) проводят окисление навески надмуравьиной кислотой по ГОСТ 13496.22-90 с последующим проведением кислотного гидролиза по ГОСТ 13496.21-87.

3. Для определения триптофана щелочной гидролиз пробы проводят по ГОСТ 13496.21-87 водным раствором гидроксида бария.

После удаления избытка кислоты (или щелочи) свободные аминокислоты переводят в ФТК-производные под действием фенилизотиоцианата в присутствии карбоната натрия и полученные растворы анализируют методом КЭ.

ПРИМЕРЫ АНАЛИЗА

УСЛОВИЯ РАЗДЕЛЕНИЯ:


Буфер:
фосфатный + β-ЦД, рН=7,8

Капилляр: Lэфф/ Lобщ = 65/75 см, ID=50 мкм

Ввод пробы: 150 мбар*с

Напряжение: + 25 кВ

Температура: + 30 ОС

Давление: 0 мбар

Детектирование: 254 нм

 
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОТЕИНОГЕННЫХ АМИНОКИСЛОТ В КОМБИКОРМАХ И СЫРЬЕ